一、 仪器介绍

实验目的：

确定重复接触受试物对哺乳动物是否可引起皮肤变态反应及其程度

试验概述：  

局部封闭涂皮试验（Buehler test，BT）和豚鼠最大值试验（uinea pig maximisation test，GPMT）是实验动物通过多次皮肤涂抹（诱导接触）或皮内注射受试物10d~14d（诱导阶段）后,给予激发剂量的受试物,观察实验动物,并与对照动物比较对激发接触受试物的皮肤反应强度。

小鼠局部淋巴结分析试验（locallymph node assay，LLNA）是通过耳部给予实验动物受试物,引起淋巴结的淋巴细胞增生,淋巴细胞增生与受试物剂量（过敏程度）成比例。利用放射性标记方法,测定试验组与对照组淋巴细胞的标记率,并进行对比,获得刺激指数,评价致敏强度。

应用范围

应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域

符合标准：

GB/T 15670.9-2017《农药登记毒理学试验方法第9部分皮肤变态反应（致敏）试验》

二、试验步骤:

1. Buehler Test（BT） 

动物模型:豚鼠

操作步骤:

诱导阶段:通过封闭式皮肤涂抹受试物，持续10-14天。激发阶段:间隔后再次涂抹受试物，观察皮肤反应。

观察指标:红斑、水肿等皮肤炎症反应的强度(主观评分)

优点:

模拟人类皮肤接触途径，适用于局部制剂(如化妆品、外用药物)

无需注射，操作相对温和。0

缺点:

敏感性较低，可能漏检弱致敏物，。依赖主观评分，存在实验者偏差。0应用场景:传统化妆品、外用药品的安全性评估。

 2.豚鼠最大值试验（GPMT）

动物模型:豚鼠

操作步骤:

诱导阶段:皮内注射受试物（常联合弗氏完全佐剂）结合皮肤涂抹，持续10-14天。

激发阶段:再次涂抹受试物，评估皮肤反应。

观察指标:与BT类似，但反应更强烈(红斑、水肿、硬结)

优点:

敏感性高，可检测强致敏物和弱致敏物;

国际公认的“金标准”，尤其适用于化学品和工业原料。

缺点:

使用佐剂可能引发过度免疫反应，导致假阳性;

动物痛苦程度较高，伦理争议较大。

应用场景:工业化学品、强致敏性物质(如染发剂、橡胶添加剂)的严格检测。

 3.小鼠局部淋巴结试验（LLNA）

动物模型:小鼠.

操作步骤:

诱导阶段:连续3天耳部涂抹受试物。

检测指标:通过3H-胸苷或BrdU标记增殖的淋巴细胞，计算刺激指数（SI）观察指标:淋巴结淋巴细胞增殖程度（SI>3判为阳性）

优点:

客观定量:减少主观评分误差；

符合3R原则:动物用量少，无需激发阶段，痛苦小;

高效快速:试验周期短(约1周)。

缺点:

对某些物质(如金属盐)敏感性不足，需使用放射性物质或特殊设备，成本较高。

应用场景:欧盟等法规优先推荐的替代方法，广泛用于药品、化妆品及化工产品的初筛。