一 仪器介绍

实验目的：

确定重复接触受试物对哺乳动物是否可引起皮肤变态反应及其程度

试验概述：  

部封闭涂皮试验Buehler testBT和豚鼠值试验uinea pig maximisation testGPMT是实验动物通过多次皮肤涂抹诱导接触或皮内注射受试物10d~14d诱导阶段后,给予激发剂量的受试物,观察实验动物,并与对照动物比较对激发接触受试物的皮肤反应强度

小鼠部淋巴结分析试验locallymph node assayLLNA是通过耳部给予实验动物受试物,引起淋巴结的淋巴细胞增生,淋巴细胞增生与受试物剂量过敏程度成比例利用放射性标记方法,测定试验组与对照组淋巴细胞的标记率,并进行对比,获得刺激指数,评价致敏强度

应用范围

应用于科研农业卫生教育雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域

符合标准：

GB/T 15670.9-2017《农药登记毒理学试验方法第9部分皮肤变态反应致敏试验》

二试验步骤:

1. Buehler TestBT 

动物模型:豚鼠

操作步骤:

诱导阶段:通过封闭式皮肤涂抹受试物持续10-14天激发阶段:间隔后再次涂抹受试物观察皮肤反应

观察指标:红斑水肿等皮肤炎症反应的强度(主观评分)

优点:

模拟人类皮肤接触途径适用于部制剂(如化妆品外用药物)

无需注射操作相对温和0

缺点:

敏感性较低可能漏检弱致敏物依赖主观评分存在实验者偏差0应用场景:传统化妆品外用药品的安全性评估

 2.豚鼠值试验GPMT

动物模型:豚鼠

操作步骤:

诱导阶段:皮内注射受试物常联合弗氏完全佐剂结合皮肤涂抹持续10-14天

激发阶段:再次涂抹受试物评估皮肤反应

观察指标:与BT类似但反应更强烈(红斑水肿硬结)

优点:

敏感性高可检测强致敏物和弱致敏物

国际的“金标准”尤其适用于化学品和工业原料

缺点:

使用佐剂可能引发过度免疫反应导致假阳性

动物痛苦程度较高伦理争议较大

应用场景:工业化学品强致敏性物质(如染发剂橡胶添加剂)的严格检测

 3.小鼠部淋巴结试验LLNA

动物模型:小鼠.

操作步骤:

诱导阶段:连续3天耳部涂抹受试物

检测指标:通过3H-胸苷或BrdU标记增殖的淋巴细胞计算刺激指数SI观察指标:淋巴结淋巴细胞增殖程度SI>3判为阳性

优点:

客观定量:减少主观评分误差

符合3R原则:动物用量少无需激发阶段痛苦小

高效快速:试验周期短(约1周)

缺点:

对某些物质(如金属盐)敏感性不足需使用放射性物质或特殊设备成本较高

应用场景:欧盟等法规优先的替代方法广泛用于药品化妆品及化工产品的初筛