仪器介绍

实验目的：

检测受试物是否引起哺乳动物骨髓细胞染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性

实验概述：

染色体是细胞核中具有特殊结构和遗传功能的小体,当化学物质作用于细胞周期G1期和S期时诱发染色体型畸变,而作用于G2期时则诱发染色单体型畸变给试验的大小鼠腹腔注入秋水仙素抑制细胞分裂时纺锤丝的形成,以增加中期分裂相细胞的比例,并使染色体丝缩短分散轮廓清晰在显微镜下观察染色体数目和形态本方法特别适用于需考虑体内代谢活化后的染色体畸变分析若有证据表明受试物或其代谢产物不能到达骨髓,则不适用于本方法

应用范围

应用于科研农业卫生教育雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域

符合标准：

GB/T 15670.16-2017《农药登记毒理学试验方法第16部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验》

二试验流程

1.动物选择:常用啮齿类动物大鼠或小鼠通常每组至少5只/性别

2.给药方案:

单次给药:通常在采样前12-48小时给药覆盖细胞周期

多次给药:若受试物代谢或毒性需重复暴露

3.阳性对照:已知致畸变剂如环磷酰胺

4.阴性对照:溶剂对照如生理盐水或DMSO

5.采样时间:通常在给药后24小时和48小时采集骨髓细胞覆盖不同细胞周期阶段

6.染色体制备:

处死动物后取出骨髓细胞

用秋水仙素Colchicine处理阻断细胞分裂于中期低渗处理固定制片并染色如Giemsa染色

7.镜检分析:

观察至少200个中期分裂相/动物记录畸变类型和频率

区分染色体型畸变如双着丝粒体和染色单体型畸变如断裂

三结果判定

1剂量相关性:畸变率随剂量增加而升高

2统计学差异:试验组畸变率显著高于阴性对照组(如p<0.05)

3生物学意义:需结合历史对照数据和畸变类型综合评估